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[자연과학]실습보고서 - 단백질 정량법

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작성일 23-09-25 22:10

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1.49㎎/㎖

② BSA를 1배, 2배, 4배, 8배 희석시킨 것과 PBS를 Micro Pipet으로 10㎍씩 따서 96 well plate에 5번째 칸부터 BSA 1.49㎎/㎖ 세로로 세 줄, 1.49/2를 세로로 세 줄 이런 식으로 순서대로 담는다.

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다.)

③ 실온에서 5분간 배양한다.

④ 컴퓨터와 UV-Visible spectrophotometer을 이용하여 흡광도를 측정(測定) 한다. 어느 단백질이든 동일한 염료를 더해준 후 약 5분 정도 reaction 시키고, 595㎚에서 흡광도를 측정(測定) 하기만 하면 되는 간단한 방법이지만 대신 Coomassie dye가 염, detergent, 지방 등에 의해 쉬이 影響을 받는다는 단점이 있따 특히나 Sample에 계면 활성제가 조금이라도 존재하는 경우, 정량 값이 크게 影響을 받게 되는데, 이는 염료로 사용하는 Coomassie Blue가 acidic하기 때문일것이다 단백질에 따라…(생략(省略))

BSA1)

PAB2)

① BSA standard를 준비한다.
◎ theory
브래드 퍼드법(Bradford method)
UV-Visible Spectrophotometer를 이용, 흡광도를 측정(測定) 하여 표준 물질인 BSA(Bovine Serum Albumin)나 BGG(Bovine Gamma Globulin)를 기준으로 자신의 시료에 단백질이 얼마만큼 들어있는지 측정(測定) 하는 방법중 하나이다. 총 15칸을 채운다. 염료로는 Coomassie Blue G-250을 사용하며, 이 염료가 단백질과 결합해 생기는 파장의 變化를 측정(測定) 한다. 신속하고 간편하게 단백질을 정량할 수 있어 널리 쓰인다. 이 데이터들을 차트로 만들면 experiment(실험)결과가 나온다. (※ Micro Pipet 사용 시 한 번 사용한 Tip은 버리고 새로운 Tip을 사용한다.
브래드 퍼드법은 실온에서 사용가능하며, 어느 특별한 장비를 필요로 하지 않는다.

⑤ 구한 차트의 함수식을 구하고 R²의 값이 1에 가까운지 확인한다. 흡광도를 측정(測定) 할때는 595㎚에서 측정(測定) 을 해야 나온다. 결과가 나오면 엑셀의 함수식 average를 이용해 mean(평균)을 구한다.

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설명

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실습보고서
`단백질 정량법`
◎ 목적
Bradford method를 통해 미지 시료의 단백질 농도를 알아보고 그 원리를 안다.

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