PCR의응용
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작성일 24-01-14 02:52
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이 효소는 pH 8.3 - 8.8, 온도 70℃-75℃ 정도에서 가장 잘 작용하며 94℃ 에서 40분 정도 유지해도 50%의 잔존활성을 나타낸다. 따라서 reaction 조건에 의해서 읽기 잘못을 일으키는 빈도가 높아지며 잘못된 conclusion(결론)에 도달할 우려가 있다 통상의 …(省略)
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2. PCR의 구성시약과 reaction 조건
PCR은 원리가 단순하고 조작이 간편한 DNA증폭법이며, 사용하는 시약도 단순한 편이다.설명
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1) 내열성 DNA polymerase와 reaction 조건
현재 가장 널리 사용되고 있는 것은 Thermus aquaticus라는 내열성 균에서 분리된 Taq DNA polymerase이다. 통상 0.5 - 2.5mmol/l의 농도 범위로 사용된다 deoxynucleotide triphosphate(dNTP)는 20 - 200 mmol/l의 농도로 사용되지만, 그 이상의 고농도는 Taq DNA polymerase가 DNA 서열을 잘못 읽는 요인이 된다 Taq DNA polymerase는 잘못 들어온 염기를 올바른 배열로 고치는 3` - 5` exonuclease 활성을 가지지 않는다. 그러나 reaction 조건은 복잡하여 조건의 설정이 어렵다. PCR에서는 1 - 2.5단위(unit)가 사용된다 활성의 발현에는 Mg2+가 필요하고, primer나 deoxynucleotide가 효소에 결합할 때 작용하며, 그 농도는 PCR의 특이성에 큰 影響(영향)을 미친다.
다.
