면역발색법
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작성일 23-10-02 03:54
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에 대하여 조사하였습니다. 이때 blocking solution은 background를 방지해주는 역할을 한다. 2차 항체가 1차 항체에 결합하여 발색하는 것을 observation하여 목표(目標) 단백질의 존재 여부를 알 수 있다 정확한 결과를 위해 항체의 비특이적 결합을 방지해주는 TBST로 세척해 준 다음 peroxidase의 기질인 luminol이 peroxidase에 의해 산화되면서 푸른색 빛을 내는 것을 X-Ray film, 또는 CCD에 감광시키는 방법인 ECL법을 통해 LAS로 membrane에 시간별로 노출시켜 결과를 얻는다. Creatin kinase 에 대한 1차 항체(anti-creatin kinase antibody)를 blocking solution(skim milk)에 희석하여 membrane에 처리한 후 1차 항체를 인지하는 2차 항체(anti-rabbit antibody)도 blocking solution에 희석하여 membrane에 처리한다. 1차 항체는 목표(目標) 단백질을 인식하여 결합하고 2차 항체는 1차 항체를 인식하여 결합한다.
면역발색법에 대하여 조사하였습니다. 이 결과를 통해 우리가 알고자 하는 단백질(creatin kinase)의 존재 여부를 확인할 수 있다
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전기영동을 마친 gel에서 단백질을 PVDF membrane으로 transfer시킨다.


